王丽霞 薛仰群 杨宣琴 白玮 畅俊平 肺硬化性血管瘤（PSH）为起源于原始呼吸道上皮细胞的一种良性肿瘤。近年来发现其发病率逐年增加，并有转移的报道。而且随着研究的深入，发现该肿瘤的免疫表型和生物学行为有别于良性病变［1］。鉴于PSH组织学形态复杂，细胞种类多样，本实验利用2种肿瘤细胞免疫表达的差异，采用免疫双荧光标记法，检测P53在PSH两种细胞中的表达，以探讨2种细胞在PSH生物学行为中的意义。 1材料和方法 1.1材料：2001—2004年山西省肿瘤医院手术切除标本中确诊的PSH10例，均为女性，年龄27～73岁，平均507岁。其中左肺4例，右肺6例。胸部X线和CT检查显示肺周围高密度肿块，圆形、孤立、境界清楚，均无肿大淋巴结和周围浸润。 1.2方法：免疫双荧光标记：从10例中选取实性区和乳头区占优势的切片，对照切片选取蜡块。P53和AE1/AE3双染检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。将标本制成5μm厚切片，常规脱蜡至水，3％H2O2灭活内源性过氧化物酶活性，高压修复，非免疫动物血清封闭，滴加混合一抗（AE1/AE3工作液与Ki-67工作液等体积混合液），湿盒4℃过夜，分别滴加四甲基异硫氰酸罗丹酮（TRITC）和异硫氰脂荧光素（FITC）标记二抗，用甘油配制的封片剂封片，4℃避光保存。 1.3结果判断：免疫双荧光组织化学：AE1/AE3定位于细胞膜，显示绿色荧光；P53定位于细胞核，红色荧光。每张切片观察20个视野，分别计数同时显示红色荧光和绿色荧光细胞以及只显示红色荧光细胞。P53着色细胞＞5％为阳性。 1.4统计学方法：采用SPSS130统计软件对数据进行处理。应用χ2检验，以P＜005为差异有统计学意义。 2结果 组织学观察：肿瘤边界清楚，无包膜。形态多样，主要有4种组织结构：实性、乳头状、血管瘤样和硬化性，大部分病例都是4种结构混合存在并相互移行。肿瘤主要由2种细胞组成：一种是位于实性区和乳头间质内的多边形细胞，大小形态较一致，胞质淡粉染或透明，细胞核呈卵圆形并可见小核仁，罕见或无核分裂像，无坏死。部分病例细胞核增大，可有轻度异型。另一种是被覆于乳头表面、血管瘤样区腔面及实性区裂隙内的细胞，大部分为立方形或扁平，被覆细胞可见不同程度的异型，部分细胞核大而深染。间质内可见肥大细胞及灶性堆积的泡膜细胞，可见含铁血黄素沉积及钙化。 免疫荧光双标记结果：共标记10例，计数20个高倍视野。6例红色（P53）单信号＞5％，分别是5%～8％；3例个别细胞显示双色信号，阳性数均＜5％；单信号与双信号细胞之间的差异无统计学意义（P＞005）。 随访结果：10例都健在，均无复发和转移病灶。 3讨论 P53基因是重要的肿瘤抑制基因。其主要生物学功能是引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡和促进细胞分化。除G0期阻滞外，P53还可使细胞阻滞在G2期［2］，约50％人类肿瘤伴有P53基因突变、过表达或杂合性丢失［3］，伴随基因突变而来的是P53肿瘤抑制功能的丧失和致癌功能的获得，免疫组织化学方法检测到的P53均为突变性P53蛋白，具有抑制细胞凋亡、促进细胞增殖的作用。 PSH一直以来对其组织学来源有争议，但现在大多数学者的研究认为2种肿瘤细胞均起源于原始未分化的呼吸上皮或肺泡Ⅱ型上皮细胞［4，5］，由于肿瘤具有与周围组织分界清，缺乏坏死与核分裂像，且预后良好等特点，故多数学者认为其属于良性肿瘤。1999年世界卫生组织（WHO）把PSH从瘤样病变的范畴归入混杂性良性肿瘤。但随着发病率的增加和研究的深入，不断有局部浸润和转移的病例报道。而且发现作为肿瘤实质的2种细胞不仅组织形态不同，基因检测和免疫表型也有差异。 本实验利用AE1/AE3中-强表达于被覆细胞，阴性或个别弱表达于间质多边形细胞的特点，采用免疫荧光双标记（AE1/AE3与P53），计数P53在2种细胞的阳性表达，分析2种细胞在PSH生物学行为中的意义。结果显示，P53在本组病例只有个别细胞显示双色信号，如果参照5％以上核表达为阳性的判断标准，应认为在被覆细胞为阴性，虽然两者无统计学意义，但Chan和Chan［6］在16例PSH的研究中观察到1例出现肺门淋巴结转移，其转移灶中仅出现多角形细胞，并且免疫组织化学标记CK（-）、EMA（＋）、FFT-1（＋），这种现象在其他作者的研究中也观察到［7］，均支持本试验结果。说明多边形细胞在抑制细胞凋亡、促进细胞增殖方面起主要作用。作为肿瘤的2种实质细胞，可能多角形细胞分化低，增殖指数较高，或P53基因突变率高于表面被覆细胞，在PHS的生物学行为中起一定的决定作用。在苏木素-伊红（HE）切片中观察到被覆细胞有一定的异型性，可能是细胞退行性改变的结果。 P53基因突变是肺癌发生频率最高的遗传改变。45％~75％的非小细胞肺癌（NSCLC）和70％以上的小细胞肺癌（SCLC）中均可探测到P53基因突变，近10年的研究结果表明，P53在非小细胞肺癌（NSCLC）中表达的阳性率为37％~69％。Tuckman［8］在恶变前的痰标本中发现了P53基因变异，并在随后发生的肺癌组织中得到验证，之后，又有许多文献报道过这方面的研究。在我们总结的10例PSH中，随访至今都健在，均未发现复发和转移病灶，但部分病例多角形细胞P53的阳性细胞数较高，虽然均没有达到肺癌的表达水平，但结合文献有转移的报道，提示PSH具有潜在恶性，手术后应延长随访时间。 限于本组病例数少，随访时间短，PSH的生物学行为有待今后增加研究指标和病例数，延长随访时间进一步探讨。 |
